Биохимические и иммунологические методы исследования
В.Ю. Мишин
Биохимические исследования проводят с целью оценки характера туберкулезного процесса, прогнозирования его течения, выявления осложнений и сопутствующей патологии.
Для оценки активности процесса и выраженности воспаления рекомендуется определять в сыворотке крови содержание гаптоглобина (Нр), церулоплазмина (ЦП) и С-реактивного белка (СРБ), белковых фракций сыворотки крови и al-антитрипсина (al-AT).
Количественную оценку степени интоксикации организма проводят путем измерения уровня молекул средней массы (МСМ) в сыворотке крови. В связи со значительной частотой сахарного диабета и пограничных нарушений углеводного обмена у больных туберкулезом в комплекс обязательных исследований обязательно включают определение уровня гликемии натощак и содержание уровня гликозилированного гемоглобина.
Поскольку современная химиотерапия представляет значительную нагрузку для печени, а сам туберкулезный процесс часто сопровождается параспецифическими ее поражениями, комплекс первичных биохимических исследований должен включать тесты для оценки сохранности паренхимы печени, ее антитоксической, белоксинтезирующей и желчевыделительной функций (определение билирубина, АЛТ, ACT, ЩФ, тимоловой пробы).
Учитывая, что главным путем выведения лекарств из организма являются почки, а при туберкулезе отмечаются разные варианты нефропатий, при первичном исследовании необходимо определить уровень мочевины в крови для исключения декомпенсированной почечной недостаточности.
Принимая во внимание значительную частоту латентно протекающей внутрисосудистой коагуляции крови у больных туберкулезом легких, ее отрицательное влияние на процессы заживления и возможность развития тромбогеморрагических осложнений, у всех больных оценвают состояние системы гемостаза по данным тромбоэластограммы и содержанию в крови фибриногена.
Иммунологические исследования применяют для оценки состояния основных систем иммунитета, определения их клеточных структур, а также степени развития специфических иммунологических реакций. Эти данные способствуют решению ряда задач:
- определению активности туберкулезного процесса;
- определению характера течения заболевания;
- проведению дифференциальной диагностики;
- выявлению иммунологической недостаточности;
- определению показаний к назначению иммуномодулирующей терапии;
- диагностике лекарственной непереносимости, возникающей в процессе химиотерапии.
Для оценки иммунного статуса больных туберкулезом используют набор иммунологических методов.
Тесты для оценки количественного состояния CD3+ и CD22+ клеток (Т- и В-лимфоцитов) ирегуляторных субпопуляций CD4+ и CD8+ клеток (Т-хелперов иТ- супрессоров):
- используют реакцию розеткообразования с бараньими эритроцитами или моноклональные антитела против поверхностных маркеров CD3 + , CD22+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов. В норме CD3 + клетки составляют 60-70%, CD22+ клетки — 15-20%, CD4+ клетки — 35—65% и CD8+ клетки — 10—30%. Индекс соотношения CD4+ : CD8+ = 1,8-2,2.
Тесты для оценки функциональной активности сенсибилизированных к соответствующим антигенам Т-лимфоцитов in vitro:
- реакция стимуляции Т-лимфоцитов митогеном фитогемаглютинином (РБТЛ с ФГА), который вызывает неспецифическую бласттрансформацию и митозы Т-лимфоцитов, свидетельствует о выраженности их функциональной активности. Лимфоциты культивируют с ФГА в течение 72 ч и определяют включение ЗН-тимидина в ДНК по числу импульсов в сцинтилляционном счетчике. В норме бласттрансформации подвергаются 50—60% лимфоцитов;
- реакция стимуляции Т-лимфоцитов с туберкулином (РБТЛ с ППД), который вызывает специфическую стимуляцию и определяет степень сенсибилизации к микобактериальным антигенам; в норме бласттрансформации подвергаются 2—6% лимфоцитов.
Перспективным иммунологическим исследованием в диагностике туберкулеза является РБТЛ с ППД и определением концентрации ИФНа-у, который в норме составляет 140 ЕД/мл.
Тесты на определение функциональной,миграционной и адгезивной активности фагоцитов (лейкоциты имакрофаги):
- реакция торможения миграции лейкоцитов с туберкулином in vitro (РТМЛ с PPD) в капиллярах. В норме индекс активности составляет 0,8-1,2.
Показателями иммунодефицита по приведенным выше иммунологическим тестам являются: количество CD3+ клеток <50%; количество CD4+ клеток <30%; количество CD8+ клеток >30% при их соотношении CD4+ : CD8+ <1,5; количество бласттрансформированн|ьгх лимфоцитов на ФГА <50%, на PPD <2%; торможение миграции макрофагов с PPD <20%.
Тесты на обнаружение антигенов МБТ и антител к ним методом иммуноферментного анализа (ИФА):
- определение противотуберкулезных антител в сыворотке крови непрямым ИФА. В этом случае противотуберкулезные антитела связываются со специфическим антигеном на пластике, что образует комплекс антиген — антитело, который «проявляется» вторым антителом против человеческого иммуноглобулина, меченого ферментом. Реакцию проявляют хромогенным субстратом. Чем интенсивнее окраска, тем больше антител связалось с антигеном;
- определение антигенов МБТ в сыворотки крови прямым ИФА. Антигены микобактерий связываются с гипериммунной кроличьей сывороткой, содержащей противотуберкулезные антитела. О наличии антигена судят по величине ингибиции (в %) противотуберкулезных антител.
Следует отметить, что диагностическое значение иммунологических тестов имеет ограниченный характер ввиду того, что положительные данные этих тестов могут быть у инфицированных здоровых лиц и отсутствовать у пациентов с явлениями иммунодефицита.