T-SPOT.TB – метод исследования предложенный для замены пробы Манту

T-Spot-testT-SPOT.TB – это иммунологический способ диагностики туберкулеза. Способ во многом похож на квантифероновый тест, он занимает 3-4 дня. Для его проведения нужна кровь исследуемого. В России использование методики Т-СПОТ утверждено в 2012 году ФЗ – 2012/648. T-SPOT разрабатывался в Оксфордском Университете и первой на вооружение его приняла Европа, в 2004 году он официально включен в стандарты диагностики туберкулеза в Евросоюзе. США и Канада включили Т-СПОТ в официальную диагностику в 2005 году, Южная Корея в 2006, Тайвань в 2009, Китайская Народная Республика в 2010, Российская Федерация и Япония в 2012 году.

Т-СПОТ.ТБ (Т-SPOT®.ТВ) является тестом для in vitro диагностики туберкулеза путем выявления эффекторных Т клеток, реагирующих на стимуляцию антигеном Mycobacterium tuberculosis, предназначенным в качестве дополнительного средства диагностики туберкулезной инфекции.

Принцип исследования. Мононуклеары периферической крови (МНПК) выделяют из образцов цельной крови и промывают, с целью удаления любых источников фонового сигнала, мешающего учету. Затем МНПК подсчитывают с тем, чтобы в анализируемый образец добавить стандартное количество клеток. Подсчет служит гарантией того, что даже для анализа образцов крови лиц с низкими содержанием Т клеток вследствие ослабления иммунной системы (иммунная недостаточность и иммуносупрессия) в лунки планшета будет добавлено соответсвующее количество клеток. Стадии промывания и подсчета клеток обеспечивают наилучшие условия для выявления больных и инфицированных туберкулезной инфекцией.

МНПК инкубируют с антигеном для стимуляции имеющихся сенсибилизированных Т клеток. Секретированные этими клетками цитокины связываются и удерживаются специфическими антителами, находящимися на поверхности мембраны, выстилающей лунку, остальные клетки удаляются при промывании. Затем специфические антитела, конъюгированные со щелочной фосфатазой и нацеленные на различные эпитопы молекулы цитокина, добавляются для связывания с цитокином, удерживаемым на поверхности мембраны планшета. Несвязанный конъюгат удаляется при промывании. В каждую лунку добавляется раствор субстрата; он расщепляется связанным ферментом и образует пятно нерастворимого преципитата в месте реакции. Каждое пятно является отпечатком одной интерферон гамма-секретирующей Т клетки, а оценка количества полученных пятен является количественной характеристикой содержания сенсибилизированных микобактериями туберкулеза эффекторных Т клеток в периферической крови.

Иммунный ответ на инфицирование М. tuberculosis является преимущественно клеточно-опосредованным. В процессе этого ответа, Т клетки сенсибилизируются к антигенам М. tuberculosis. Активированные эффекторные Т клетки, CD4 и CD8, выделенные из крови, могут быть подсчитаны благодаря способности стимулироваться этими антигенами in vitro 1,2. Применение специально подобранных антигенов ESAT-6 и CFP10, входящих в состав микобактерий комплекса М. tuberculosis (М tuberculosis, М bovis, М africanum), повышает эффективность и специфичность теста, так как эти антигены отсутствуют в БЦЖ и во многих других не вирулентных для человека микобактериях, находящихся в окружающей среде3,4

Т-СПОТ.ТБ (Т-SPOT®. ТВ) является упрощенным вариантом иммуноферментного метода ELISPOT, в котором цитокины связываются буквально рядом с секретирующими их клетками, до растворения в супернатанте и до захвата рецепторами соседних клеток или разрушения. Поэтому анализ ELISPOT значительно более чувствителен, чем традиционно применяемый метод ИФА 5. Т-СПОТ.ТБ (T-SPOT®.TB) предназначен для выявления эффекторных Т клеток, которые отвечают на стимуляцию специфическим антигеном М. tuberculosis3,4,6’9, и позволяет подсчитать отдельные активированные ТБ-специфичные Т клетки. Данный анализ может быть применен для всех пациентов, находящихся в группе риска по латентной туберкулезной инфекции, а также для лиц с подозрением на туберкулез10,11 вне зависимости от их возраста, пола, иммунного статуса, терапии.

Название T-SPOT.TB расшифровывается так:

  • литера T обозначает T-лимфоциты, клетки крови, на основе ответа которых производится исследование;
  • Слово SPOT это перевод с английского языка, означающий “пятно”. В результате лабораторного опыта в лунке образуются пятна, каждое из которых маркирует Т-лимфоцит;
  • .TB это сокращенное международное обозначение туберкулеза.

Этот способ определения носительства туберкулеза очень чувствителен и информативен, он позволяет исключить ложноположительные реакции на носительство микобактерии туберкулеза в случаях, когда большинство тестов ошибаются или неточны. По разным оценкам и в разных регионах земного шара чувствительность Т-СПОТ оценивается от 87 до 97%, информативность также доходит до 97%. Как вы знаете, диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных осложнена, а Т-СПОТ в этих случаях весьма информативен и надежен. Есть и другие случаи, в которых использование этого теста предпочтительно.

Показания к предпочтительному исследованию Т-СПОТ:

  • у детей, привитых БЦЖ, у которых выявлено ложноположительная реакция Манту. В этом случае ценно сделать это малоинвазивное исследование до рентгенографии легких.
  • у лиц с аллергическими и аутоимунными заболеваниями;
  • у медицинских работников, людей, которые много путешествуют, военных, беременных;
  • у заключенных или прибывших из мест заключения;
  • у больных наркоманиями;
  • у лиц, контактирующих с туберкулезными больными;
  • у пациентов, проходящих терапию подавляющую иммунитет, как например, глюкостероидная или лучевая терапия, лечение с замещением функции почек;
  • при наличии хронических заболеваний, сопровождающихся снижением или истощением иммунитета, как например, сахарный диабет, уже упоминавшийся ВИЧ, или пневмокониозы;
  • при подозрении на внелегочные формы туберкулеза.

Внимание! Вакцинация БЦЖ не влияет на результаты теста T-SPOT. Важно помнить, что Т-СПОТ является способом количественной диагностики наличия в организме туберкулеза, но не дает возможности отличить активную форму туберкулеза от латентной.

T-SPOT при ВИЧ. Этот тест у носителей ВИЧ имеет особое значение в диагностике туберкулеза. Вирус иммунодефицита поражает как раз те клетки, которые используются для диагностики в любом из IGRA-тестов, к которым относится и T-SPOT, т.е. клетки CD4. В ходе исследований обнаружилось, что даже на поздних стадиях развития ВИЧ, когда количество лимфоцитов CD4 уже не превышает ста на мм3, выявляемость туберкулеза при помощи Т-СПОТ остается очень высокой.

Отличия Т-СПОТ от исследования ПЦР. ПЦР – это исследование ДНК, а так как исследуется именно мокрота, ПЦР исключает возможность определить внелегочные формы туберкулеза. Получается, что Т-СПОТ – универсальный способ диагностики туберкулеза, а ПЦР мокроты специфический. Вероятно поэтому Т-СПОТ, наряду с квантифероновым тестом во всем цивилизованном мире именуют «Золотым стандартом» в диагностике туберкулеза.

Отличия Т-СПОТ от диаскинтеста и квантиферонового теста. C квантифероновым тестом T-SPOT во многом сходен, а вот с диаскинтестом отличий много. Например, Диаскинтест противопоказан лицам с аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, он лишен количественных параметров оценки, чаще бывает ложноотрицательным. Диагностика при помощи диаскин-теста невозможна при отсутствии у пациента иммунного ответа на туберкулин.

Квантифероновый тест также хорош и точен как T-SPOT, главное различие в том, что квантифероновый тест определяет гамма-интерферон, вырабатываемый в ответ на внедрение туберкулезной палочки, а Т-СПОТ определяет сами Т-клетки, которые вырабатывают гамма-интерферон на присутствие микобактерии туберкулеза.

tbspot

Какой тест лучше квантифероновый или Т-СПОТ. Разницы никакой, они одинаково чувствительны и информативны, потому что в одном случае определяется количество Т-клеток, а в другом количество гамма-интерферона, который они выделяют. Стоимость и сроки их проведения также очень похожи.

Как достигается высокая специфичность T-SPOT. Интересно, что вирусологи нашли у вирулентной Микобактерии туберкулеза фрагмент генома, который отсутствует в БЦЖ, используемой для прививки. Лучше диаскин-теста Т-СПОТ в Лабтест Этот фрагмент, называемый RD1, был утрачен в процессе создания вакцины где то между 1908 и 1931 годами. Антигены к RD1 — ESAT-6 и CFP10 избирательно взаимодействуют только с теми Т-клетками, которые “знакомы” с фрагментом RD1. А этого фрагмента нет в обычной прививке. Выяснилось также, что его нет и у микобактерий, которые любят провоцировать ложно-положительную реакцию на туберкулез в здоровом организме, таких как Micobacterium kanzasii, M.marinum, M.szulgai и проч. Все это позволило Т-СПОТ стать надежным и высокоинформативным методом диагностики как латентного, так и активного туберкулеза. Высокая точность диагностики позволяет избежать ненужных и, зачастую, вредных лечебных курсов и исследований.

T-SPOT.TB предназначен:

  • Только для диагностики in vitro.
  • Только для профессионального применения.
  • Закрытый набор реагентов следует хранить при температуре от 2 до 8 °С. После истечения срока годности, обозначенного на этикетке, набор не пригоден для дальнейшего использования.
  • Вскрытый набор реагентов допускается хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 8 недель после вскрытия, но не более срока годности набора.
  • Запрещается смешивать компоненты из разных наборов.
  • Перед использованием необходимо внимательно прочитать приложенную инструкцию.
  • Следует соблюдать правила препятствующие загрязнению реагентов, лунок планшета, клеточных суспензий и клеточной среды.
  • Следует избегать изменений рекомендованной техники пипетирования и отмывки, времени инкубации и/или температуры, т.к. они могут повлиять на полученные результаты.
  • Кровь у обследуемого лица должна забираться не более, чем за 8 ч до начала исследования.
  • Хранение и транспортирование образцов крови в лабораторию производится при температуре от 18 до 25 °С. Образцы цельной крови нельзя ни охлаждать, ни замораживать.
  • Т-СПОТ.ТБ (Т-SPOT®.ТВ) следует применять и интерпретировать только совместно с общей клинической картиной. Негативный результат теста не исключает возможности инфицирования М. tuberculosis. Антигены ESAT-6 и CFP10 отсутствуют в штаммах БЦЖ и у большинства микобактерий, циркулирующих в окружающей среде, за исключением М kansasii, М szulgai и М. marinum3,4 и М. gordonae.

Как подготовится к сдаче анализа. За два часа до исследования нельзя есть. Кровь забирают из вены.

Результатом анализа Т-СПОТ.ТБ могут быть три варианта ответа.:

  1. Отрицательный – организм не инфицирован туберкулёзом («ТБ-отрицательный результат» свидетельствует, что образец вероятно не содержит эффекторных Т клеток, реактивных (специфически сенсибилизированных) к М. tuberculosis)
  2. Положительный – организм инфицирован туберкулёзом («ТБ-положительный результат» свидетельствует, что образец содержит эффекторные Т клетки реактивные (специфически сенсибилизированные) к М. tuberculosis.)
  3. Сомнительный – довольно редкий вариант ответа. Необходимо наблюдение в динамике, понадобится повторная сдача анализа или дополнительные методы обследования, например, ПЦР или антитела к туберкулёзу с консультацией фтизиатра.
Метки
Bactec АБП Абсцесс Аллергия Альвеолиты Анализы БЦЖ Беременность Биопсия Бронхи Бронхит Бронхоаденит Бронхоблокация Бронхолитиаз Бронхоскопия Бронхоэктазы Брюшина ВИЧ Вакцинация Витамины Гастрит Гепатит Гипертония Глаза Глотка Гортань Дезинфекция Дети Диабет Диспансер Диссеминированный Желудок Закон Зубы Иммунитет Инфильтративный КУМ Кавернозный Казеозная пневмония Кисты Кишечник Классификация Кожа Коллапсотерапия Кости Кровь Курение ЛФК Лаборатория Лазер Лимфогрануломатоз Лимфоузлы МБТ МЛУ МСЭ Менингит Микобактериоз Микоз Микроскопия Миндалины Мокрота Мониторинг Моча Мочеполовой Наркомания Нервы и психика Обследование Озонирование Опухоль Очаг Очаговый ПТК ПЦР Паротит Патогенетические Первичный Перикардит Печень Питание Пищевод Плазмаферез Плеврит Пневмокониозы Пневмония Побочные Поджелудочная Пожилые Позвоночник Посев Почки Профилактика Пьянство Рак Режимы лечения Рентген Рот Санаторий Санбюллетень Саркоидоз Сердце Симптомы Стационар Суставы Трахея Туб. интоксикация Туберкулома Устойчивость ФВД Фиброзно-кавернозный ХНЗЛ Химиотерапия Хирургия ЦНС Цирротический Шок ЭКГ Эмпиема Эндоскопия Язва

Туберкулез в цифрах и фактах

Туберкулёз — это инфекционное заболевание, вызываемое микобактериями из группы Mycobacterium tuberculosis complex, или иначе — палочками Коха. Чахотка (от слова ...
Подробнее

Полезны ли медицинские маски

Австралийские ученые заявили, что тканевые медицинские повязки не защищают от вирусов и инфекций. Кроме того, использовать их в ситуациях, когда риск ...
Подробнее

Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза органов дыхания с множественной и широкой лекарственной устойчивостью возбудителя

Васильева И. А    Эргешов А. Э. Множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) микобактерий туберкулеза (МБТ)- это устойчивость возбудителя к сочетанию изониазида ...
Подробнее

Клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза органов дыхания у взрослых

Яблонский П. К. профессор,д.м.н. Васильева И. А. профессор, д.м.н Основными методами оценки эффективности химиотерапии являются микроскопические и культуральные исследования диагностического ...
Подробнее

Что собой представляет туберкулезный процесс?

Петр Савченко Не торопитесь сказать, что наука знает ответ на этот вопрос. Человек и так совершил много ошибок в спешке ...
Подробнее